Rotavírusová infekcia

Infekcia rotavírusom alebo črevná / žalúdočná chrípka je infekčné ochorenie so symptomatickou liečbou. Rotavírusová infekcia je najčastejšia u detí.

Rotavírusová infekcia predstavuje osobitné nebezpečenstvo pre deti, pretože väčšina infekcií sa vyskytuje v tejto konkrétnej populácii.

Kauzálny agens rotavírusovej infekcie

Infekcia je spôsobená rotavírusmi - vírusmi z rodiny Reoviridae, ktoré sú si navzájom podobné v antigénnej kompozícii.

Zdroj infekcie

Zdrojom infekcie je chorý človek. Najnebezpečnejší z hľadiska prenosu infekcie je pacient v prvých 3 - 5 dňoch klinických prejavov rotavírusovej infekcie, pretože v tomto období je obsah vírusu v vylučovaných výkaloch najväčší.

Mechanizmus prenosu

Hlavným mechanizmom prenosu vírusu je fekálne-orálne, menej často - cesta kontaktu-domácnosť šírenia prostredníctvom prenosu rotavírusu s infikovanými objektmi. Zvlášť nebezpečné sú v tomto ohľade mliečne výrobky. Nízke teploty zvyčajne nezničia vírus, takže skladovanie potravín v chladničke nezabraňuje vzniku infekcie rotavírusom.

Obdobie epidemickej infekcie rotavírusom

Vypuknutie choroby sa vyskytuje v období jesene a zimy, avšak v ostatných ročných obdobiach sa môžu vyskytnúť aj prípady výskytu ochorenia. Spravidla je šírenie a výskyt charakteristických príznakov infekcie rotavírusom sprevádzané vznikom epidémie chrípky, preto sú ľudia infikovaní rotavírusom, ktorý je viac známy ako "črevná chrípka".

patogenézy

Po vstupe do ľudského tela vstupuje vírus do buniek sliznice tenkého čreva, čo spôsobuje deštrukciu čriev. Syntéza špecifických enzýmov, ako aj porušovanie sekrečnej funkcie črevnej sliznice, vedie k ťažkej hnačke a dehydratácii tela v dôsledku veľkého množstva elektrolytov a vody vstupujúcej do črevného lúmenu.

Príznaky infekcie rotavírusom:

• upchatie nosa;
• bolesť hrdla;
• kašeľ;
• bolesť brucha;
• nevoľnosť, vracanie, hnačku;
• bolesť hlavy, horúčka.

poradňa:

Hlavné obdobia infekcie rotavírusom:

• inkubačná doba trvá 1-2 dni;
• akútne obdobie trvá 3-7 dní;
• zotavenie trvá 4-5 dní.

Choroba je charakterizovaná akútnym nástupom, ale prítomnosť prodromálneho obdobia je možná (asi 2 dni). Môže spôsobiť indispozíciu, celkovú slabosť, bolesť hlavy, zvýšenú únavu, stratu chuti do jedla, nepríjemné pocity a rachot v žalúdku. Okrem toho je možný vývoj prejavov ochorenia na časti horných dýchacích ciest: upchatie nosa, bolesť hrdla, ľahký kašeľ.

Celkový klinický obraz zahŕňa syndrómy intoxikácie, gastroenteritídu a lézie horných dýchacích ciest.

Prejavmi gastroenteritídového syndrómu sú: hlasné rachotenie v bruchu, bolesť, väčšinou v hornej časti brucha, nevoľnosť, vracanie, hnačka. Hnačka s infekciou rotavírusom má vodnatú penovú konzistenciu a je žltá alebo zelenožltá.

Prejavy intoxikačného syndrómu: únava, slabosť, bolesť hlavy. V ťažkých prípadoch: závraty, mdloby.

Porážku horných dýchacích ciest charakterizuje nádcha, upchatie nosa, bolesť hrdla, kašeľ. Zev, keď má jasne červenú farbu.

Komplikácie a úmrtnosť

Ťažké formy ochorenia, sprevádzané ťažkou dehydratáciou, sú charakterizované rozvojom kardiovaskulárnej nedostatočnosti, dokonca smrti (v 2-3% prípadov). Po infekcii sa vytvára nestabilná imunita, ktorá sa časom oslabuje, takže je možná opätovná infekcia.

Diagnóza rotavírusovej infekcie

Diagnóza infekcie rotavírusom je možná len vtedy, ak je u ľudí detekovaný rotavírus pomocou laboratórnych diagnostických metód, ako je PCR - polymerázová reťazová reakcia, RPHA - pasívna hemaglutinačná reakcia, väzba CSC - komplementu, imunofluorescencia a mnoho ďalších.

Kompletný krvný obraz ukáže leukocytózu s neutrofilným ľavým posunom, zvýšenú ESR - v akútnom období. Pre obdobie zotavenia sa vyznačuje normalizáciou krvného obrazu. Analýza moču bude vykazovať bielkoviny, leukocyty a červené krvinky, hyalínové fľaše v malých množstvách.

Rotavírusová infekcia - liečba črevnej chrípky u dospelých a detí

Liečba je symptomatická, pretože neexistujú žiadne špecifické antirotavírusové lieky na boj proti rotavírusu.

Princípy liečby rotavírusovej infekcie:

1. Izolácia pacienta s infekciou rotavírusom
2. Boj proti dehydratácii. Na tento účel je vhodné použiť špeciálne roztoky solí, napríklad rehydron, fyziologický roztok. Používajú sa pri liečbe pacienta v nemocnici, ale fyziologický roztok na obnovenie normálneho acidobázického stavu tela možno pripraviť doma: 1 lyžičku na 1 liter vody. Odporúča sa piť veľa minerálnej vody.
3. Boj proti teplote musí začať pri teplote 38, 5 a vyššej. Súčasne, v závislosti od typu horúčky, je potrebné použiť fyzikálne metódy na zníženie teploty, napríklad trenie tela vodou a chemikálií - užívanie špecifických liekov, u detí je lepšie používať sviečky.
4. Prijatie enzýmových prípravkov, adsorpčných a adstringentných činidiel (aktívne uhlie, polysorb), prípravkov mliečnych baktérií.
5. Je zakázané užívať lieky proti bolesti na bruchu.

Indikácie pre podanie do nemocnice na infekciu rotavírusu:

• progresívne zhoršenie, predĺžená hnačka;
• vznik nových príznakov.

Diéta pre infekciu rotavírusom:

Strava zahŕňa vyhýbanie sa mlieku a mliečnym výrobkom vrátane mliečnych výrobkov. Odporúča sa zahrnúť do diétneho kurací vývar alebo ryžovej kaše, uvarenej vo vode bez pridania oleja. Je potrebné jesť v malých porciách s prestávkami. Odporúča sa obmedziť príjem potravy bohatej na sacharidy.

Prevencia rotavírusovej infekcie

Medzi kľúčové preventívne opatrenia pri infekcii rotavírusom patria:

• Zabránenie vniknutiu vírusu do tela, vrátane izolácie chorého, pravidelného umývania rúk, konzumácie osvedčených a vysokokvalitných výrobkov, použitím destilovanej vody, umývania zeleniny a ovocia;
• hygienická kontrola stravovacích zariadení a výrobkov v obchodoch, trhoch.

Pred použitím informácií poskytnutých webovou stránkou medportal.org si prečítajte podmienky užívateľskej zmluvy.

Používateľská zmluva

Stránka medportal.org poskytuje služby podľa podmienok opísaných v tomto dokumente. Ak začnete používať túto webovú stránku, potvrdzujete, že ste si pred používaním tejto stránky prečítali podmienky tejto zmluvy s užívateľmi a akceptujete všetky podmienky tejto zmluvy v plnom rozsahu. Nepoužívajte túto stránku, ak s týmito podmienkami nesúhlasíte.

Popis služby

Všetky informácie zverejnené na tejto stránke sú len informatívne, informácie prevzaté z otvorených zdrojov sú referenciou a nie sú reklamou. Stránka medportal.org poskytuje služby, ktoré umožňujú užívateľovi vyhľadávať lieky v údajoch získaných z lekární ako súčasť dohody medzi lekárňami a medportal.org. Na uľahčenie používania údajov o liekoch na mieste sa doplnky stravy systematizujú a dostanú do jediného pravopisu.

Stránka medportal.org poskytuje služby, ktoré umožňujú užívateľovi vyhľadávať kliniky a ďalšie lekárske informácie.

obmedzenie zodpovednosti

Informácie umiestnené vo výsledkoch vyhľadávania nie sú verejnou ponukou. Administrácia stránky medportal.org nezaručuje presnosť, úplnosť a (alebo) relevantnosť zobrazených údajov. Administrácia stránky medportal.org nezodpovedá za škody alebo škody, ktoré ste mohli utrpieť v dôsledku prístupu alebo nemožnosti prístupu na stránku alebo z používania alebo neschopnosti používať túto stránku.

Prijatím podmienok tejto zmluvy plne rozumiete a súhlasíte, že:

Informácie na stránke sú len informatívne.

Administrácia stránky medportal.org nezaručuje absenciu chýb a nezrovnalostí týkajúcich sa deklarovaných na stránke a skutočnej dostupnosti tovaru a cien za tovar v lekárni.

Užívateľ sa zaväzuje objasniť informácie, ktoré sú predmetom záujmu, telefonicky do lekárne alebo použiť informácie poskytnuté podľa vlastného uváženia.

Administrácia stránky medportal.org nezaručuje absenciu chýb a nezrovnalostí týkajúcich sa pracovného harmonogramu kliník, ich kontaktných údajov - telefónnych čísel a adries.

Administrácia stránky medportal.org, ani žiadna iná strana zapojená do procesu poskytovania informácií nenesie zodpovednosť za akékoľvek škody alebo škody, ktoré ste mohli vzniknúť v dôsledku úplného spoliehania sa na informácie uvedené na tejto webovej stránke.

Správa stránky medportal.org sa zaväzuje a zaväzuje sa vyvinúť ďalšie úsilie na minimalizáciu rozdielov a chýb v poskytnutých informáciách.

Administrácia stránky medportal.org nezaručuje absenciu technických porúch, vrátane prevádzky softvéru. Administrácia stránky medportal.org sa zaväzuje čo najskôr urobiť všetko pre to, aby sa v prípade ich výskytu odstránili akékoľvek chyby a chyby.

Používateľ je upozornený, že administrácia stránky medportal.org nie je zodpovedná za návštevu a používanie externých zdrojov, odkazy, ktoré môžu byť obsiahnuté na stránke, neposkytujú súhlas s ich obsahom a nenesú zodpovednosť za ich dostupnosť.

Správa stránky medportal.org si vyhradzuje právo pozastaviť stránku, čiastočne alebo úplne zmeniť jej obsah, vykonať zmeny v užívateľskej zmluve. Takéto zmeny sa vykonávajú len na základe uváženia správy bez predchádzajúceho upozornenia používateľa.

Beriete na vedomie, že ste si prečítali podmienky tejto užívateľskej zmluvy a plne akceptujete všetky podmienky tejto zmluvy.

Informácie o reklame, na ktorých má umiestnenie na stránke zodpovedajúcu dohodu s inzerentom, sú označené „ako reklama“.

Rotavírusová infekcia

Rotavírusová infekcia (rotavírusová gastroenteritída) je akútne infekčné ochorenie spôsobené rotavírusmi, charakterizované symptómami všeobecnej intoxikácie a poškodením gastrointestinálneho traktu s rozvojom gastroenteritídy.

Kód ICD-10
A08.0. Rotavírusová enteritída.

Etiológia (príčiny) infekcie rotavírusom

Kauzatívny agens je členom rodiny Reoviridae, rodu Rotavirus (rotavírus). Názov je založený na morfologickej podobnosti rotavírusov s kolesom (z latinského "rota" - "wheel"). Pod elektrónovým mikroskopom, vírusové častice vyzerajú ako kolesá so širokým nábojom, krátkymi lúčmi a jasne definovaným tenkým okrajom. Vírus rotavírusu s priemerom 65 - 75 nm sa skladá z elektrón-hustého centra (jadra) a dvoch peptidových škrupín: vonkajšej a vnútornej kapsidy. Jadro 38 - 40 nm obsahuje vnútorné proteíny a genetický materiál reprezentovaný dvojvláknovou RNA. Genóm rotavírusov u ľudí a zvierat sa skladá z 11 fragmentov, čo je pravdepodobne dôvod pre antigénnu diverzitu rotavírusov. Replikácia rotavírusov v ľudskom tele prebieha výlučne v epitelových bunkách tenkého čreva.

Rotavírusová infekcia, pohľad v elektrónovom mikroskope

V rotavíruse sa našli štyri hlavné antigény; hlavný je skupinový antigén, proteín vnútornej kapsidy. Berúc do úvahy všetky antigény špecifické pre skupinu, sú rotavírusy rozdelené do siedmich skupín: A, B, C, D, E, F, G. Väčšina ľudských a zvieracích rotavírusov patrí do skupiny A, v ktorej sú rozlíšené podskupiny (I a II) a sérotypy. Podskupina II zahŕňa až 70 - 80% kmeňov izolovaných od pacientov. Existujú dôkazy o možnej korelácii určitých sérotypov so závažnosťou hnačky.

Rotavírusy sú odolné voči environmentálnym faktorom: v pitnej vode, otvorených vodách a odpadových vodách pretrvávajú až niekoľko mesiacov, u zeleniny - 25 - 30 dní, bavlny, vlny - až 15 - 45 dní. Rotavírusy sa nezničia opakovaným zmrazovaním, pôsobením dezinfekčných roztokov, éteru, chloroformu, ultrazvuku, ale uhynú pri varení, ošetrené roztokmi s pH vyšším ako 10 alebo menej ako 2. Optimálne podmienky pre vírusy: teplota 4 ° C a vysoká (> 90%) alebo nízke (Autor: Infekčné ochorenia: národné vedenie, redigoval ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

Diagnóza rotavírusovej infekcie

tvrdím
Zástupca vedúceho
Hlavný epidemiologický
Odbor ministerstva zdravotníctva ZSSR
G.G.ONISCHENKO

7. marca 1989 N 15-6 / 6

Rotavírusová infekcia

(METODICKÉ ODPORÚČANIA)

Ústav poliomyelitídy a vírusovej encefalitídy, Akadémia lekárskych vied ZSSR.

Výskumný ústav epidemiológie Ministerstva zdravotníctva ZSSR;

Výskumný ústav epidemiológie a mikrobiológie. GN Gabrievskogo Ministerstvo zdravotníctva RSFSR;

Združenie vedeckej výroby "Rostepidkompleks";

Celoeurópsky vedecký výskumný ústav dezinfekcie a sterilizácie Ministerstva zdravotníctva ZSSR.

Usmernenia sú určené pre odborníkov a výskumných pracovníkov zdravotníckych orgánov a inštitúcií.

Ľudský rotavírus patrí do skupiny zvieracích vírusov, ktoré sú podobné, a ktoré okrem toho zahŕňajú vírus hnačky nebraska (NCDV), vírus epizootickej hnačky mladých myší (EDJM), vírus opíc (SA-II), vírus pochádzajúci z črevného obsahu oviec a kostí. hovädzieho dobytka (0), ako aj patogénov hnačkových ošípaných, žriebät, šteniatok a iných zvierat. Všetky tieto vírusy majú rovnakú veľkosť a tvar a sú antigénne blízke.

Zvieratá rotavírusu sa dobre množia v tkanivovej kultúre, a preto sa izolujú a študujú pred ľudským rotavírusom. Rotavírusy teliat a opíc sa kvôli svojej antigénnej blízkosti k ľudskému rotavírusu použili na stanovenie etiologickej úlohy pri akútnej gastroenteritíde a doteraz sa používali pri sérologickej diagnostike a získavaní imunoreagentov.

Ľudský rotavírus bol detegovaný elektrónovou mikroskopiou v duodenálnych epiteliálnych bunkách a v extraktoch výkalov typických pacientov, kde je často obsiahnutý vo veľmi významných koncentráciách (až 10 častíc v 1,0 g výkalov). Vírion rotavírusu je dvoj kapsidový (tj potiahnutý dvojvrstvovým proteínovým plášťom) sférickej častice s priemerom 70 - 75 nm, obsahuje ribonukleovú kyselinu - RNA (11 dvojvláknových segmentov), ​​má plávajúcu hustotu v chloridu céznom 1,36 g / cu. cm so sedimentačným koeficientom 500 - 530 S

Podľa dostupných charakteristík sa ľudský rotavírus spolu s vyššie uvedenými zvieracími vírusmi klasifikoval ako rod Rotavirus z čeľade Reoviridae. Názov "rotavírus" je odvodený z latinského rota - koleso, ktoré častice vírusu pripomínajú v preparátoch elektrónového mikroskopu.

Podľa antigénnej špecificity, detegovanej pomocou ELISA, sú rotavírusy rozdelené do dvoch podskupín (označených rímskymi číslicami - I a II) a podľa špecificity, detegovanej v neutralizačnej reakcii, 4 (a možno viac) sérotypov (označených arabskými číslicami - 1). 2, 3, 4). Špecifickosť podskupín určitých rotavírusov je určená hlavným proteínom vnútornej kapsidy a ich sérotypová špecificita je určená glykoproteínom vonkajšej kapsidy. Nedávno boli objavené rotavírusy nového typu (tzv. Pararotavírusy), ktoré nemajú skupinový špecifický antigén.

Rotavírusová infekcia je veľmi rozšírená. Informácie o jeho identifikácii boli zverejnené v Austrálii, Veľkej Británii, NDR, Kanade, Indii, Španielsku, USA, Francúzsku, Japonsku a mnohých ďalších krajinách. V Sovietskom zväze boli ochorenia rotavírusovej gastroenteritídy zaznamenané u detí a dospelých v mnohých regiónoch RSFSR, Zakaukazsku, Ukrajine, pobaltských štátoch, strednej Ázii a ďalších územiach. Medzi deťmi a dospelými sa môže rotavírusová infekcia prejaviť vo forme sporadických prípadov, chorôb miestnych skupín a hromadného prepuknutia s pokrytím rôznych skupín obyvateľstva na veľkých plochách. Medzi hospitalizovanými pacientmi s akútnymi črevnými infekciami je v priemere 10 - 15% podiel dospelých s gastroenteritídou rotavírusov, detí 15 - 27% alebo viac. Údaje z literatúry o izolácii rotavírusu (antigénu) u zdravých detí a dospelých sú veľmi protichodné: od 0 do 0,5 až 42% u detí a od 0 do 7% alebo viac u dospelých. Rotavírusová infekcia sa zaznamenáva počas celého roka. Viac ako 70% pacientov sa však zistí v chladnom období. V zimno-jarnom období je zaznamenaná väčšina prepuknutí infekcie rotavírusom medzi obyvateľstvom, ako aj skupinové ochorenia novorodencov a predčasne narodených detí, detí organizovaných skupín, starších ľudí. Nezistili sa výrazné rozdiely v distribúcii rotavírusových infekcií (detí aj dospelých) podľa pohlavia.

Zdrojom infekcie pri akútnych črevných infekciách etiológie rotavírusu sú infikovaní dospelí a deti - pacienti so zjavnou formou infekcie alebo asymptomatickými vylučujúcimi rotavírusmi s výkalmi. Zároveň sú deti prvého roka života často infikované z matiek infikovaných rotavírusom a starších detí a dospelých z detí organizovaných skupín detí. Infekcia ľudí zo zvierat nie je dokázaná, aj keď možnosť nie je vylúčená. V súčasnosti sa rotavírusy rôznych sérotypov nachádzajú v exkrementoch takmer 50 druhov zvierat a vtákov s výraznými príznakmi hnačky a bez nich.

Rotavírusy u pacientov a osôb bez klinických prejavov ochorenia sa v súčasnosti nachádzajú len vo výkaloch. Pacienti vylučujú rotavírusy do životného prostredia od prvého dňa choroby, zatiaľ čo u všetkých pacientov sa počas prvých piatich dní ochorenia zistilo maximálne množstvo patogénov v stolici (až 10 - 10 vírusových častíc na 1 g), čo určuje najväčšie epidemiologické riziko pacientov voči iným osobám. tohto obdobia choroby. Počas nasledujúcich 6 až 10 dní prudko klesá uvoľňovanie rotavírusov s výkalmi pacientov, ako sa normalizuje stolica. Priemerná dĺžka vylučovania rotavírusov pacientmi je 7–8 dní, u niektorých pacientov však môže toto obdobie trvať až 20–30 dní. Osoby bez klinických prejavov ochorenia môžu dlhodobo uvoľňovať rotavírusy výkalmi - až niekoľko mesiacov alebo dlhšie (obdobie pozorovania).

Hlavným mechanizmom prenosu rotavírusov je fekálne-orálne, ktoré sa uskutočňuje prenosom vody, jedla a domácich ciest. V prípade sporadických a lokálnych ochorení sa infekcia rotavírusmi vyskytuje prevažne v domácnostiach. To prispieva k veľmi nízkej patogénnej dávke rotavírusov (v rámci 10 vírusových častíc). Bolo zistené, že na rôznych miestach životného prostredia si rotavírusy zachovávajú životaschopnosť od 10 do 15 dní (v závislosti od teploty a vlhkosti) až jeden mesiac; vo výkaloch niekoľko týždňov až sedem mesiacov.

V súčasnosti sú v našej krajine av zahraničí zaznamenané ohniská infekcie spôsobenej vodou a potravinami. Rotavírusy sa nachádzajú vo vode riek, jazier, morí, podzemných vôd, vodovodnej vody, niektorých potravinárskych výrobkov (mlieko atď.).

Predpokladá sa možnosť implementácie v niektorých prípadoch odkvapkávania, prachu a iných ciest rotavírusu.

Rotavírusy sú tiež známe ako jedno z hlavných etiologických činidiel pri nozokomiálnych (nozokomiálnych) prepuknutiach akútnej gastroenteritídy. V nemocniciach rôznych profilov sa môže nakaziť až 50-60% chorých detí. Existujú prípady prepuknutia v pôrodniciach. Často postihuje deti, ktoré sú umelo kŕmené, trpia akútnymi a chronickými ochoreniami, s rôznymi typmi imunodeficiencie.

Imunita citlivosti. Ľudia všetkých vekových skupín sú náchylní na rotavírus. Najvyššia citlivosť je pozorovaná u detí vo veku 6 mesiacov. až 2 roky. Protilátky proti rotavírusom sú zistené u 50 - 60% detí v prvom roku života, vo veku nad 3 roky - viac ako u 90% au takmer všetkých dospelých. Podľa literatúry však prítomnosť protilátok v sére v podstate indikuje len stretnutie ľudského tela s rotavírusom, a nie prítomnosť imunity, pretože aj pri významnej hladine humorálnych protilátok sú možné opakované ochorenia. Imunita s infekciou rotavírusom nie je úplne objasnená. Predpokladá sa, že rezistencia na infekciu je spôsobená hlavne lokálnou imunitou buniek epitelu tenkého čreva, ktorá je spojená s prítomnosťou sekrečných protilátok triedy IgA. Tieto protilátky sa tiež nachádzajú v mlieku dojčiacej matky a zjavne slúžia ako faktor pri pasívnej imunizácii novorodencov, ktoré pri absencii klinických prejavov ochorenia výkalmi môžu uvoľňovať významné množstvá rotavírusov do životného prostredia a infikovať predčasne narodené deti a deti s nepriaznivým predorbidným pozadím. Rotavírusy rôznych sérotypov nevytvárajú krížovú imunitu, a preto môže mať rovnaké dieťa alebo dospelý opakované ochorenia spôsobené inými sérotypmi vírusu. Nestabilný charakter imunity u pacientov s gastroenteritídou rotavírusu je tiež zaznamenaný, opakované ochorenia sa často zaznamenávajú 1 - 1,5 roka po infekcii.

Vlastnosti epidemického procesu s rotavírusovou infekciou:

- všadeprítomnosť územného rozloženia;

- ťažká zimná alebo zimná jarná sezónnosť;

- nízka infekčná dávka patogénu a vysoké ohniská v organizovaných skupinách;

- poškodenie osôb všetkých vekových skupín;

- vysoký podiel prípadov medzi deťmi vo veku do 2 rokov s maximálnou detekciou chorôb medzi deťmi v druhej polovici života;

- vysoká aktivita vodných a domácich ciest prenosu;

- lokalita domácich ohnísk, väčšinou obmedzená na rodinu;

- možnosť asymptomatickej izolácie rotavírusov u detí a dospelých;

- možnosť nozokomiálnej infekcie s účasťou zdravotníckeho personálu a rodičov chorých detí.

Klinický obraz infekcie rotavírusom má veľa spoločného s klinickými prejavmi akútnych črevných ochorení odlišnej etiológie, čo sťažuje diagnostiku tohto ochorenia. Existuje však niekoľko charakteristických rozdielov, ktoré umožňujú včasné podozrenie na túto chorobu a správne vykonávanie protiepidemických a terapeutických opatrení.

Inkubačná doba je krátka a trvá od 15 hodín do 3 - 5 dní, ale najčastejšie - 1 - 3 dni.

Väčšina pacientov má akútny nástup ochorenia, keď sa počas prvých dní ochorenia vyvíja celý komplex symptómov. U malých detí je možný subakútny nástup, ktorý sa vyznačuje výskytom ochorenia v prvých dňoch 1 alebo 2 príznakov a pridaním odpočinku od 2 do 3 dní choroby. Najviac patognomonická pre rotavírusovú infekciu je poškodenie gastrointestinálneho traktu, ktorý je u 60 - 70% pacientov kombinovaný s rozvojom symptómov poškodenia dýchacích ciest. Niekedy môžu predchádzať 3 - 4 dňovým intestinálnym dysfunkciám katarálne symptómy. Respiračný syndróm je charakterizovaný miernou hyperémiou a zrnitosťou hltana, mäkkého podnebia a palatínových oblúkov, upchaním nosa, kašľom, ktorý je na rozdiel od ARVI menej výrazný, nemá tendenciu zvyšovať sa a má krátkodobý charakter (4 - 5 dní). Hnačka sa vyskytuje u 95–97% pacientov. Pre rotavírusovú infekciu je charakteristický vývoj gastroenteritídy, menej enteritídy. Stolička je zvyčajne tekutá, vodnatá, penivá, zle sfarbená, bez nečistôt alebo s malým množstvom hlienu. U malých detí prevláda vodnatá hnačka, čo vysvetľuje častejší vývoj exikózy v tejto vekovej skupine. Frekvencia stolice v priemere nepresahuje 4 až 5 krát denne, ale u mladších detí môže dosiahnuť 15 až 20 krát. Trvanie hnačky u dospelých a starších detí je 3 - 7 dní, u dojčiat často trvá 10 - 14 dní. Zvracanie je kardinálnym symptómom a je zaznamenané u 80% pacientov s infekciou rotavírusom. Najčastejšie sa vyskytuje súčasne s hnačkou alebo predchádza jej. Zvracanie sa často opakuje, ale krátkodobo (1 - 2 dni). Opakované a nekontrolovateľné zvracanie pre túto infekciu nie je typické a často poukazuje na zmiešanú infekciu. Teplota spravidla nepresahuje 38,5 - 39 ° C a je normalizovaná 3-4 dňami ochorenia. Najtypickejšími príznakmi celkovej intoxikácie sú slabosť, letargia, slabosť, bolesť hlavy, závraty. Závažnosť ochorenia je určená vývojom izotonickej exikózy, stupňa I - II, menej často stupňa III, čo je častejšie u dojčiat. Zároveň sú straty elektrolytov (Na a K) malé, čo sa musí brať do úvahy pri vykonávaní rehydratačnej terapie.

4. Diagnostika a diferenciálna diagnostika

Objektívne vyšetrenie u pacientov zaznamenalo letargiu, hyperémiu spojiviek a vaskulárnu injekciu skléry. Mierne potiahnutý jazyk, suchý. Brucho je mäkké, mierne bolestivé pri hmatoch v oblasti tenkého čreva. Pečeň a slezina nie sú zväčšené. Blind a sigmoid hrubého čreva mäkké, bezbolestné. Krvný tlak sa znižuje. Pulz nie je preťažený, ale skôr existuje tendencia k relatívnej bradykardii. Neexistujú žiadne meningeálne javy. V periférnej krvi sa na samom začiatku ochorenia môže vyskytnúť mierna leukocytóza, od 2 do 3 dní ochorenia je tendencia k leukopénii so znížením počtu bodných leukocytov a zvýšením počtu lymfocytov a monocytov, ESR nie je urýchľovaná.

V laboratórnej analýze moču existuje malá albuminúria, rýchlo prechádzajúca mikrohematuria, mierny nárast počtu leukocytov a možný výskyt hyalínových valcov. Zmeny v moči sú v súlade so závažnosťou ochorenia a dehydratáciou.

Mikroskopické vyšetrenie výkalov, počet leukocytov v zornom poli nepresahuje 10 - 15, je tu prímes hlienu.

Rektoromanoskopicky je možné odhaliť miernu hyperémiu sliznice konečníka a hrubého čreva sigmoidu bez fokálnych zmien.

Rotavírusová gastroenteritída je rozdelená podľa závažnosti, ktorá je určená intenzitou hnačky a jej dehydratáciou, ako aj závažnosťou celkovej intoxikácie. Existujú tri stupne závažnosti gastroenteritídy rotavírusu: mierne, stredne ťažké a menej závažné.

Diferenciálna diagnóza sa uskutočňuje salmonelózou, cholerou, dyzentériou, toxikoinfekciou vyvolanou jedlom, spôsobenou podmienečne patogénnymi mikroorganizmami, persiniózou a inou vírusovou gastroenteritídou.

Gastrointestinálna forma salmonelózy je charakterizovaná súčasným ochorením osôb, ktoré konzumovali nekvalitné produkty. Typicky akútny nástup: hypertermia, závažné zimnice, vracanie, silná bolesť brucha, hojná plodná stolica, ktorá si zachováva svoj fekálny charakter, neutrofilnú leukocytózu s posunom vzorca leukocytov vľavo. Pri salmonelóze nedochádza k žiadnym zmenám v sliznici hltanu, zväčšenie pečene. Diagnóza rieši izolácia patogénu pri bakteriologickom vyšetrení výkalov, zvracania alebo výplachu žalúdka.

Podľa mnohých klinických príznakov hmotnosti a rýchlosti ochorenia sa môže rotavírusová gastroenteritída podobať cholere. Rotavírusová infekcia sa však vyznačuje miernejším priebehom, a to najmä tým, že sa nevyvíja stav algidu, ako aj prítomnosť typických zmien v sliznici orofaryngu.

Najdôležitejšie sú výsledky bakteriologického výskumu v prípade detekcie Vibrio cholerae. Podobná situácia nastáva pri infekcii NAG.

Bakteriálna dyzentéria je charakterizovaná akútnou bolesťou brucha, častou, niekedy falošnou, nutkaním, stolicou zmiešanou s hlienom a krvou, výraznou sigmoiditídou, konštantnou febrilnou reakciou, patologickými zmenami v distálnej časti hrubého čreva podľa rektoskopie. Všetky tieto príznaky, ako aj výsledky bakteriologického výskumu, umožňujú relatívne jednoduchú realizáciu diferenciálnej diagnostiky pre kolitídu vo forme dyzentérie. Pri gastroenterickej forme úplavice sa hodnota výsledkov bakteriologického vyšetrenia dramaticky zvyšuje.

Diferenciálna diagnostika rotavírusovej gastroenteritídy a jedovatých toxikoinfekcií vyvolaných oportunistickými patogénmi je vzhľadom na nedostatočné znalosti klinického obrazu týchto ochorení obzvlášť ťažké. Podľa diagnostického významu laboratórnych štúdií by sa mali uprednostniť pozitívne výsledky virologických a imunologických štúdií, ktoré potvrdzujú rotavírusovú povahu ochorenia, a nie detekciu podmienečne patogénnych baktérií v stolici pacienta.

Pre gastrointestinálnu formu periniózy je charakteristický postupnejší nástup, prítomnosť, gastroenteritída, bolesti svalov a kĺbov; pečeň je zvyčajne zväčšená; stolica je viskózna kvôli významnej zmesi hlienu a niekedy je možná aj krv. Leukocytóza je zaznamenaná v krvi; Zvýšenie ESR.

Gastroenteritický syndróm môže byť výrazný pri niektorých vírusových ochoreniach. Patrí medzi ne adenovírusová infekcia, ktorá je popri črevných léziách charakterizovaná konjunktivitídou, rinitídou, faryngitídou, angínou zápalu mandlí, bronchitídou, pneumóniou, zvýšením krčných lymfatických uzlín, pečene, sleziny, predĺženej horúčky.

Z enteritídy a gastroenteritídy, spôsobenej enterovírusmi Koksaki a ECHO, je rotavírusová gastroenteritída charakterizovaná monosyndromickým klinickým obrazom, v ktorom sa nachádza črevné poškodenie. Naproti tomu pri epidémiách epidémie vírusu enterovírusu je zaznamenaná prítomnosť rôznych klinických foriem ochorenia, čo je "mnohorakosť" klinického obrazu, v ktorom môžu hrať významnú úlohu symptómy poškodenia membrán mozgu, kože a horných dýchacích ciest.

Diferenciálna diagnóza rotavírusovej infekcie s kolibacilózou u detí je najťažšia a môže byť založená na nasledujúcich kritériách:

- väčší akútny nástup rotavírusovej infekcie v porovnaní s kolibacilózou, najmä spôsobený enteropatogénnou kolibacilózou;

- rýchlejšie zotavenie sa z rotavírusovej infekcie, dokonca aj u malých detí;

- vyššia frekvencia respiračného syndrómu v prípade infekcie rotavírusom, ale jeho menšia závažnosť a trvanie.

Najväčším problémom je diagnostika zmiešaných rotavírusovo-bakteriálnych infekcií, ktorých podiel v zimných obdobiach roka je pomerne veľký (7 - 10% všetkých OKI).

Znakom kliniky zmiešaných infekcií je prítomnosť komplexov príznakov charakteristických pre obe kombinované infekcie: zvýšenie symptómov intoxikácie, výskyt príznakov zápalových zmien v sliznici tenkého a hrubého čreva a pomalšie zotavenie.

Hospitalizácia detí a dospelých s podozrením na OCI spôsobených rotavírusmi sa vykonáva podľa klinických príznakov (závažnosť ochorenia) a epidemiologických indikácií (prítomnosť slabých detí v prostredí pacienta, detí v prvom roku života, navštevovanie ústavov predškolských detí, pracovníkov potravinárskeho priemyslu a osôb, ktoré sú im prirovnávané) neschopnosť dodržiavať protiepidemický režim doma atď.). Deti mladšie ako jeden rok s ťažkými príznakmi OCI sú hospitalizované ako prvé. Povinná je samostatná hospitalizácia pacientov s podozrením na gastroenteritídu rotavírusu a akútne črevné infekcie inej etiológie (oddelené oddelenia, boxy). Musí sa dodržiavať zásada „jednorazového plnenia“ komôr (škatúľ).

Liečba pacientov s gastroenteritídou rotavírusov, berúc do úvahy existujúce predstavy o patogenéze tohto ochorenia, zahŕňa úsporný režim a kompenzáciu za porušenie funkčného stavu čreva, obnovu rovnováhy hydroelektrolytov a detoxikáciu organizmu.

V čase akútneho obdobia ochorenia je predpísaná diéta 4-B, v ktorej dochádza k prudkému obmedzeniu sacharidov (až 200 g) a zvýšeniu množstva bielkovín (až 150 g) s miernym poklesom obsahu kalórií (2400 kal.). Množstvo cukru je obmedzené na 40 g denne, zeleniny a ovocia. Mlieko je vylúčené. Soľ nie je obmedzená.

Účelom takýchto domácich tráviacich multienzýmových prípravkov ako oraz, solizim, somilaz, ktorý je pri liečbe pacientov s gastroenteritídou rotavírusu nie je horší ako dovoz (panzinorm, tráviaci, slávnostný, trienzým atď.), Je uvedené.

Stupeň dehydratácie organizmu je nevyhnutne hodnotený a terapia je zameraná na doplnenie nadmerných strát vody a solí. Pri dehydratácii je stupeň I - II podľa V.I. Roztoky glukózy a elektrolytov sa orálne podávajú Pokrovskému (rehydron glukosolanu), berúc do úvahy stratu tekutín a elektrolytov a po dehydratácii stupňa III je potrebné začať liečbu intravenóznym podávaním roztokov vody a soli (trisol, kartozol, chlosol, acesol) atď.

Taktika zavádzania roztokov sa vykonáva v súlade so zásadami rehydratačnej terapie.

S cieľom stabilizovať normálny krvný obeh a detoxikáciu, môžete zadať koloidné roztoky (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Je potrebné zdôrazniť, že predpisovanie antibakteriálnych liekov, ak nie je sprievodná bakteriálna infekcia, nie je odôvodnené.

Odporúča sa používať adsorpčné a adstringentné lieky.

Liečba vírusovej infekcie sa v súčasnosti nevyvíja.

Extrakt rekonvalescentov sa vykonáva po stabilnej (do 2 - 3 dní) normalizácii stolice a vymiznutí všetkých ostatných klinických príznakov základného ochorenia pri absencii komplikácií.

Deti navštevujúce predškolské zariadenia, pracovníci potravinárskych zariadení a osoby, ktoré sú im priradené, dostávajú jednorazové virologické vyšetrenie po vymiznutí klinických príznakov.

Zostávajúce kontingenty pacientov nepodliehajú povinnému laboratórnemu vyšetreniu.

6. Laboratórna diagnostika

Laboratórna diagnostika gastroenteritídy rotavírusu v súčasnosti nie je zložitá. Rýchly rozvoj klinického syndrómu a krátkodobého pobytu v nemocnici diktuje potrebu použitia rýchlych metód na určenie etiológie ochorenia. Väčšina laboratórnych diagnostických metód odporúčaných v tomto návode umožňuje detekovať rotavírusy počas prvého dňa. Voľba metódy v každom prípade je určená technickým vybavením laboratória, ako aj dostupnosťou vhodných činidiel.

Pri retrospektívnej analýze ochorenia sú dôležité tradičné metódy detekcie sérologických zmien v sére pacientov (neutralizačná reakcia, inhibícia hemaglutinácie a fixácia komplementu). Preto sa pre včasnú sérologickú diagnostiku infekcie rotavírusom odporúča stanovenie protilátok triedy IgM.

Predmetom virologickej štúdie chorého je zvyčajne výkaly. Prítomnosť a distribúcia rotavírusov v životnom prostredí sa zisťuje skúmaním vzoriek pôdy, potravy a vody (odpadová voda, voda z prírodných a umelých nádrží, pitná voda).

6.1. Detekcia rotavírusov v klinickom materiáli

a vo vzorkách životného prostredia

6.1.1. Príprava vzorky na testovanie; vzorkovanie

Pri odbere vzoriek na virologický výskum sú splnené niektoré všeobecné požiadavky, pričom sa prijímajú opatrenia na ochranu materiálu pred kontamináciou. Vzorky sa odoberajú iba v sterilných nádobách s hustou gumovou zátkou, vystuženou lepiacou omietkou. Vzorky prepravujte v nádobách s ľadom alebo chladivom.

6.1.2. Príprava suspenzie, objasnenie, t

čistenie vzorky, odstránenie bakteriálnej flóry

Príprava vzoriek výkalov na štúdiu na rotavíruse zahŕňa prípravu 10% suspenzie, homogenizáciu, centrifugáciu pri 3000 ot / min. do 30 minút, aby sa odstránila bakteriálna flóra. Pri skúmaní predmetov životného prostredia a potravinárskych výrobkov sa vykonáva predkoncentrácia študovaného materiálu.

6.1.3. Koncentrácia vírusových častíc vo vzorkách vody

Koncentrácia rotavírusov je dôležitou podmienkou na zvýšenie účinnosti ich detekcie vo vodných útvaroch životného prostredia.

Metóda koncentrovania rotavírusov pomocou adsorpčnej chromatografie na poréznom oxide kremičitom - makropórovom skle (MPS) - je jednoduchá a pohodlná, s použitím objemov vody od 0,1 do 10 litrov. Keď vzorka prechádza vrstvou MPS, vírus sa sorbuje na povrchu skla. Na elúciu vírusu s použitím roztokov, ktoré sú schopné spôsobiť desorpciu vírusu. Vírus sa zo skla odstráni malým objemom roztoku, čo vedie k koncentrácii desiatok až stokrát v porovnaní s pôvodnou vzorkou.

Na zlepšenie adsorpčných vlastností sa domáce prípravky zo skla značky MPS-1000 VGH spracujú nasledovne: pripraví sa zmes (1: 1) 3% vody a 6 M HCl. Sklo sa naplní pripravenou zmesou v pomere 1 objem skla na 2 objemy zmesi. Varte v digestore (bez zátky) 1 hodinu, dodržiavajte bezpečnostné opatrenia. Premyte destilovanou vodou na neutrálne pH. Suší sa pri 100 ° C.

Sklenená kolóna, vopred upravená silikónovou tekutinou, naplnená sklom (2 - 3 cm3), namočená v destilovanej vode. K testovanej vzorke (3 I) sa pridá 1 M roztok MgCl na konečnú koncentráciu 0,05 M. Voda sa nechá prejsť kolónou rýchlosťou 150 až 500 ml / h, pričom prietok sa nastaví pomocou klipov. Cez kolónu sa nechá prejsť 10 ml elučného roztoku: mäsový extrakt 3%, pH 9,0; alebo tryptofázový fosfátový bujón 1%, pH 9,0; alebo Tris HCl 0,1 M, obsahujúci 2 M NaCl, pH 11,0 (roztoky sú uvedené v poradí, v ktorom sa znižujú ich elučné vlastnosti). Frakcie sa sorbujú v objeme 1 ml, pH vo frakciách sa upraví na neutrálnu hodnotu.

6.2. Detekcia vírusových častíc pomocou elektrónovej mikroskopie (EM) a imunoelektrónovej mikroskopie (IEM) t

Pretože obsah rotavírusových častíc vo výkaloch typických pacientov je zvyčajne vysoký v prvých 2 až 3 dňoch choroby, EM metóda sa široko používa na detekciu rotavírusu, ktorý sa môže použiť na detekciu rotavírusových častíc bez ďalšej koncentrácie fekálnej suspenzie.

Na prípravu liečiv sa aplikuje kvapka skúmanej 10% suspenzie na doštičku zubného vosku alebo voskovaného papiera. Na kvapku filmového substrátu dolu naneste predmetnú elektrónovo-mikroskopickú mriežku. Po 1 - 3 minútach mriežka sa premyje na kvapke destilovanej vody a kontrastnom roztoku (2% roztok kyseliny fosforečnej, upravený na pH 6,5 - 6,6 s 1 NKOH), ktorého prebytok po 30 - 40 sekundách. odstráňte filtračný papier a sieťka sa vysuší. Prezeranie prípravkov sa uskutočňuje v elektrónovom mikroskope s prístrojovým zväčšením 30 - 50000x.

Rotavírusy sú celkom ľahko detegované EM vyšetrením fekálnych suspenzií v charakteristických veľkostiach a morfológii vírusových častíc. Rotavírusy by sa mali odlíšiť od rôznych vírusových častíc a vírusom podobných útvarov, bakteriofágových častíc a bakteriálnych bičíkov nachádzajúcich sa vo výkaloch.

Použitie technológie IEM umožňuje v niektorých prípadoch nielen zvýšiť percento detekcie rotavírusov, ale aj dokázať ich etiologickú úlohu. V štúdii IEM sa 0,1 ml 1: 5 imunitného séra zvierat zmieša s 0,4 ml 10% fekálneho extraktu. Zmes sa inkubuje 1 hodinu pri teplote miestnosti a potom 12 hodín pri 4 ° C, potom sa odstredí 90 minút. pri 15 000 otáčkach za minútu Supernatant sa vypustí a výsledná zrazenina sa resuspenduje v niekoľkých kvapkách destilovanej vody, kontrastuje s 2% roztokom kyseliny fosforotvornej (pH 6,5) a umiestni sa na mriežku predmetu; Prebytočná vlhkosť sa odstráni filtračným papierom. Štúdium liečiv sa uskutočňuje v elektrónovom mikroskope s inštrumentálnym zväčšením 50000x, pri pohľade na najmenej päť buniek predmetnej mriežky. V prípade pozitívneho výsledku sa častice rotavírusu detegujú v prípravkoch vo forme špecifických klastrov (imunitné komplexy).

6.3. Detekcia antigénu rotavírusu v testovanom materiáli

6.3.1. Získanie imunoreagentov

Hyperimunitné séra a špecifické imunoglobulíny proti rotavírusu sa získajú imunizáciou králikov, morčiat, kurčiat.

Antigén na imunizáciu sa pripravil nasledujúcim spôsobom: 5 ml suspenzie kultúry rotavírusu SA-II sa spracovalo trypsínom, pridalo sa do 1,5-litrových matracových baniek s monovrstvou heteroploidných buniek obličky 4647 zelených opíc, inkubovalo sa 60 minút pri 37 ° C; pridajte udržiavacie médium bez séra a inkubujte 24 až 48 hodín pri 37 ° C. Všetka biomasa sa podrobí trojnásobnému zmrazeniu alebo sonikácii, pridá sa PEG M 6000 až 8 - 10% koncentrácia, nechá sa 20 hodín pri 4 ° C, potom sa odstredí pri 10 000 otáčkach za minútu. 2 hodiny Peleta sa resuspenduje v PBS (1/30 - 1/50 objemu biomasy). Po čistení freónom 113 sa vodná fáza použije na imunizáciu zvierat a ako antigén v imunologických štúdiách. Koncentrát v objeme 1 ml obsahuje aspoň 10 vírusových častíc.

Imunizácia králikov: králikom sa intravenózne injikujú 2 ml rotavírusového prípravku v 1., 7., 35., 42. deň a krv sa odoberie na 49. deň po začiatku imunizácie. V deň 1 a 35 sa antigénu injektuje ďalšie Freundovo kompletné adjuvans na niekoľkých miestach chrbta.

Frakcia imunoglobulínu sa vyzráža z hyperimunitného králičieho séra s 10% vodným roztokom polyetylénglykolu (PEG) s molekulovou hmotnosťou 6000. Zrazenina sa izoluje centrifugáciou, rozpustí a dialyzuje proti 0,01 M K-fosfátovému pufru (pH - 7,4) s 0:01 M Nace ( FSB). Koncentrácia imunoglobulínov sa stanovila spektrofotometricky.

Imunizácia morčiat: zvieratám sa intramuskulárne injekčne podá 0,5 ml koncentrovaného rotavírusového prípravku s rovnakým objemom Freundovho kompletného adjuvans v 1.14. A 28. deň, odoberanie krvi dva týždne po poslednej imunizácii.

Imunizácia kurčiat: 20-týždňové kurčatá nosníc hybridov bielych plemien Leghorn Zarya-17 sa imunizujú intravenózne v čase 1, 14, 28 dní. Počas prvej imunizácie sa antigén podáva dodatočne intramuskulárne v zmesi s rovnakým objemom Freundovho kompletného adjuvans. Maximálne množstvo protilátky v žĺtku sa pozoruje po tretej imunizácii. Kurčatá môžu byť trvalo použité po reimunizácii.

Izolácia imunoglobulínov kurčiat: žĺtok sa oddelí od proteínu v nálevke alebo Büchnerovom lieviku a premyje vodou z vodovodu. Žĺtok (10 ml) sa prenesie do centrifugačnej skúmavky, pridá sa dvojitý objem (20 ml) FSB a dôkladne sa premieša. PEG 6000 sa aplikuje na koncentráciu 3,5% (hmotn./obj.) A mieša sa 10 minút. pri 14000 g. Supernatant sa prefiltruje cez filtračný papier do odmerného valca. Pridá sa ďalší PEG 6000 do konečnej koncentrácie 12% a mieša sa. Vyzrážané imunoglobulíny sa izolujú centrifugáciou (10 minút, 14 000). Zrazenina sa rozpustí v 5 ml FSB (1/2 objemu žĺtka). Koncentrácia proteínu v prípravku je zvyčajne 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Metóda enzýmového imunotestu (ELISA) t

Metóda enzýmovej imunoanalýzy (ELISA), založená na použití protilátok označených enzýmovou molekulou (peroxidázou), je jednou z najbežnejších a najúčinnejších a špecifických metód na detekciu vírusového antigénu. Zvyčajne sa používajú priame a nepriame možnosti "sendvič". Enzýmový marker detekovaný vo farebnej reakcii so substrátom. Priamy ELISA variant je rýchlejší ako nepriamy, ale je menej citlivý a špecifický. Vo formulácii nepriameho variantu sa používa anti-špecifický komerčný konjugát imunoglobulínov s enzýmom; Aby sa zabránilo nešpecifickým interakciám medzi konjugátom a protilátkami sorbovanými na paneli, je potrebné mať antivírusové séra dvoch rôznych živočíšnych druhov.

Nepriamy variant ELISA: Do jamiek sa zavedie 0,1 ml anti-tromtaunových imunoglobulínov zo žĺtka vajíčok imunizovaných kurčiat v polovici (48) jamiek. V druhej polovici sú imunoglobulíny z vajíčok, ktoré boli položené pred imunizáciou, zavedené ako negatívna kontrola. Sorpcia imunoglobulínov sa uskutočňuje z roztoku s koncentráciou 5 μg / ml v PBS cez noc pri 4 ° C. Obsah jamiek sa vyprázdni, jamky sa premyjú PBS-T a 0,1 ml testovanej vzorky sa aplikuje do PBS-T s 1% BSA a 0,01 M EDTA do jamiek s antirotavírusom a normálnymi imunoglobulínmi a inkubuje sa 1 hodinu pri 37 ° C.

Po premytí sa do jamiek v PBS-T pufri pridá 0,1 ml králičieho anti-rotavírusového séra zriedeného na 1: 1000 - 1: 25000. Optimálne riedenie séra sa stanoví v prednastavených experimentoch. Panely sa uzavrú a inkubujú sa 2 hodiny pri 37 ° C. Jamky sa premyjú a pridá sa 0,1 ml komerčného prípravku peroxidázou značených protilátok proti králičiemu IgG v koncentrácii 1 až 2,5 μg / ml v obsahu peroxidázy v PBSB-T-BSA a inkubuje sa 1 hodinu pri 37 ° C. Jamky sa premyjú, pridá sa 0,1 ml čerstvo pripravenej zmesi substrátu (O-fenyléndiamín 0,5 mg / ml v 0,05 M Na-citrátovom pufri pH 5,0; HO - 0,03%. (Pozor! opatrne!)) a inkubujte pri teplote miestnosti v tme počas 30-40 minút. Enzymatická reakcia sa zastaví pridaním 0,05 ml 3 M H SO. Výsledky reakcie zohľadňujú vizuálne alebo spektrofotometricky. Vzorky sa považujú za pozitívne, ktorých optická hustota nie je menšia ako dvojnásobok optickej hustoty negatívnej kontroly.

6.3.3. Koaglutinačná metóda

Tento spôsob je založený na schopnosti proteínu A Staphylococcus aureus z Cowan kmeňa spojiť sa s Fc-fragmentom IgG a počas tvorby špecifického komplexu antigén-protilátka spôsobiť aglutinačný jav.

Na formuláciu koaglutinačnej reakcie sa používa komerčné suché stafylokokové činidlo obsahujúce proteín A (Pasteurov výskumný ústav elektrochemickej medicíny, Leningrad), ktorý sa pred použitím rehydratuje v 0,1% roztoku metylénovej modrej.

Predtým sa každá séria hyperimunného séra testovala na prítomnosť antistafylokokových protilátok. Za týmto účelom sa na sklenenom sklíčku premiešajú rovnaké objemy séra v zriedení 1: 500 a 10% suspenzie stafylokokov. Vezmite do úvahy výsledky do 5 minút vzdelávania. Pre prácu vybraných sérov, ktoré neobsahujú antistafylokokové protilátky v riedení 1: 500. Na prípravu diagnostiky sa 0,01 ml anti-ratavírusového séra zriedeného 1:10 s FSB zmieša s 0,5 ml 10% suspenzie stafylokokov, udržuje sa pri teplote miestnosti počas 1 hodiny, potom sa pridá 9,5 ml FSB (diagnostum). Rovnakým spôsobom je stafylokoky senzibilizované preimunným sérom (kontrolné činidlo). Diagnostické a kontrolné činidlo sa používajú pri reakcii PKA a TRKA.

Na usporiadanie RCA v jamkách v tvare u sa vyrobí 0,05 ml PBS pH-7,4; V dvoch jamkách sa mikrotitra Takacchi alebo dávkovača 0,05 ml 10% suspenzie výkalov pripravia a pripravia sa sériové dvojnásobné riedenia 1: 2 - 1: 256. Do jamiek v prvom rade sa pridá 0,05 ml diagnostika a do jamiek druhého radu 0,05 ml kontrolného činidla. Panely sú pokryté vekom a inkubované v termostate pri 37 ° C - 3 hodiny. V každom experimente bola vzorka suspenzie fekálií pozitívna a negatívna na rotavírus, ako aj lyzáty buniek infikovaných rotavírusom SA-II, testované skôr elektrónovou mikroskopiou.

Zváženie reakcie: výsledky sa považujú za pozitívne, ak sa spolu s diagnostickým vyšetrením zistí aglutinačný „dáždnik“ s negatívnym výsledkom alebo 4-násobným znížením titra súbežne s kontrolným činidlom. Výsledky sa považujú za negatívne, keď sa disky vytvárajú v oboch paralelných radoch. Aby sa eliminovala nešpecifická koaglutinácia v párovaných radoch, suspenzia výkalov sa adsorbovala s rovnakým objemom normálneho králičieho séra pri 37 ° C počas 2 hodín, nasledovalo zahrievanie na 80 ° C počas 45 minút. Potom znovu skúsenosti v reakcii koaglutinácie.

6.3.4. Metóda koaglutinácie v tuhej fáze (TRKA) t

Táto metóda detekcie rotavírusových antigénov je založená na princípoch imunoanalýzy na pevnej fáze (pozri 4.3.2). Na rozdiel od týchto látok však TRCA nepoužíva enzým ako označenie, ale diagnostické a kontrolné činidlo (pozri 4.3.3).

Na usporiadanie TRKA používajte imunologické panely s jamkami v tvare u. Na senzibilizáciu sa do jamiek pridá 0,1 ml hyperimunného séra zriedeného 0,01 M pufrom uhličitan-hydrogenuhličitan (pH 9,6) 1: 1000. Panely séra sa nechali 2 až 3 hodiny pri 37 ° C. Nenaviazané na protilátky v pevnej fáze sa odstránia premytím trikrát počas 3 minút. FSBT. Potom sa pripraví 0,05 ml skúmaných, ako aj zjavne pozitívnych a negatívnych vzoriek (2 jamky pre každú vzorku) v jamkách a nechá sa 2 hodiny pri teplote 37 ° C za vzniku komplexov antigén-protilátka. Nenaviazaný antigén a príbuzné nečistoty sa odstránia trojitým praním PBS. Potom sa do jednej jamky pridá 0,05 ml 0,5% stafylokokového diagnostika, v druhej (kontrola) 0,05 ml 0,5% suspenzie stafylokokov senzibilizovaných preimunitným sérom (pozri 4.4.3). Inkubácia sa uskutočňuje buď 1 až 2 hodiny pri 37 ° C, potom nasleduje 1 až 3 hodiny pri 4 ° C alebo 18 až 24 hodín pri 4 ° C. Vizuálne sa berie do úvahy výsledok aglutinačnej reakcie: s pozitívnou reakciou vytvárajú aglutinované baktérie dáždnik; s negatívnou reakciou - baktérie sa úplne usadzujú vo forme disku.

6.3.5. Spôsob nepriamej hemaglutinácie

V tomto spôsobe je detekcia antigénu rotavírusu založená na použití diagnostického činidla erytrocytovej protilátky, čo je ovčie erytrocyty senzibilizované imunoglobulínovou ascitovou tekutinou bielych potkanov imunizovaných rotavírusom SA-II.

Dvojnásobné riedenia 10% fekálnej suspenzie v panelových jamkách sa testujú s diagnostickým erytrocytom. Aglutinácia diagnostika erytrocytov indikuje prítomnosť rotavírusového antigénu vo vzorke. Podrobný opis postupu na formuláciu PHA je uvedený v pokynoch pripojených k súprave na prípravu (Vedecká produkčná asociácia "Rostepidkompleks", Rostov-on-Don).

Súprava Rotatest je založená na reverznej pasívnej hemaglutinácii a je určená na detekciu rotavírusu v stolici a na detekciu protilátok proti rotavírusu v krvných sérach.

6.3.6. Metóda imunocytochemickej detekcie rotavírusu

Spôsob je založený na imunochemickom stanovení vírusového antigénu syntetizovaného v bunkách v dôsledku ich infekcie materiálom obsahujúcim vírus.

Výhodou metódy v porovnaní s testom ELISA je vyššia citlivosť, ako aj schopnosť určiť a kvantifikovať infekčnosť testovanej vzorky.

Štádium experimentu: transplantované bunky obličky zelenej opice v koncentrácii 3 až 10 buniek / ml urobili 0,2 ml v jamkách panelov s plochým dnom a inkubovali pri 37 ° C (24 až 48 hodín). Bunky sa potom premyjú Eagle-MEM médiom. Testovaný materiál sa zriedi v Eagle-MEM médiu, aktivuje sa 1 hodinu pri 37 ° C v prítomnosti 10 ug / ml trypsínu a pridá sa v 0,1 ml v najmenej 4 jamkách. Pozitívne kontroly sú jamky, do ktorých bol vložený materiál, o ktorom je známe, že obsahuje rotavírus. Negatívne kontroly: jamky s neinfikovanými bunkami a jamkami, do ktorých sa zaviedol materiál podobný testu, ale neobsahovali rotavírusy. Adsorpcia sa uskutočňuje 1 hodinu pri 37 ° C, potom sa médium odstráni, bunky sa premyjú Eagle-MEM médiom. Do jamiek sa pridá 0,2 ml média Eagle-MEM s 1 μg / ml trypsínu a inkubuje sa 48 hodín pri teplote 37 ° C.

Bunky sa dvakrát premyjú fyziologickým roztokom a fixujú sa studeným (-20 °) 85% acetónom, inkubujú sa 2 hodiny pri -20 ° C a potom sa odstráni acetón. Panel sa trikrát premyje PBS obsahujúcim 0,05% Tween 20 (PBS-T). Do jamiek sa pridá 0,1 ml zriedenej 1: 1000 v PBS-T imunitnom anti-rotavírusovom sére. Inkubujte 2 hodiny pri 37 ° C. Po premytí panelu sa 0,1 ml peroxidázou značenej anti-IgG králičej protilátky (komerčný prípravok) pridá do jamiek v jamke v koncentrácii 2 μg / ml obsahom peroxidázy v PBS s 1% BSA a inkubuje sa 1,5 hodiny pri 37 ° C. C.

Panel sa dvakrát premyje PBS-T a raz 0,05 M acetátovým pufrom, pH 5,0. Do jamiek sa pridá 0,1 ml čerstvo pripraveného roztoku peroxidázového substrátu obsahujúceho 10 ml acetátového pufra / 4 mg 3-amino-9-etylkarbazolu (AEC) rozpusteného v 0,5 ml acetónu a 0,01 ml 33% peroxidu vodíka. (Pozor! Práca s AEC vyžaduje opatrnosť). Inkubujte 30-40 minút. v tme pri teplote miestnosti. Reakcia sa zastaví premytím panelu destilovanou vodou.

Účtovanie reakcie sa uskutočňuje pod svetelným mikroskopom s malým zväčšením. Negatívne kontrolné jamky nesmú obsahovať zafarbené bunky. Lokálne zhluky zafarbených buniek sú ložiská vírusovej infekcie.

6.3.7. Imunofluorescenčná metóda

Na identifikáciu antigénu rotavírusu pomocou imunofluorescencie sa použije bunková línia 4647. Bunky sa kultivujú na krycích sklíčkach alebo sklíčkach uzavretých v ampulkách alebo skúmavkách s penicilínom. Infikovaná kultúra sa inkubuje 24 až 48 hodín pri 37 ° C, potom sa z liekoviek vyberú sklá, premyjú sa 0,15 M fyziologickým roztokom s prídavkom fosfátového pufra pri pH 7,2, premyjú sa destilovanou vodou a sušia sa na vzduchu. Potom sa prípravky fixujú v dvoch posunoch (vždy 10 minút) chemicky čistého acetónu ochladeného na 4 ° C.

Prípravky sa spracúvajú nepriamym spôsobom vo vlhkej komore. Jedna kvapka imunitného rotavírusového králičieho séra sa aplikuje na kultivačné bunky a inkubuje sa 30 minút. pri 37 ° C, potom sa liečivá premyjú trikrát v FSB a odstránia sa prebytočná vlhkosť. Mokré prípravky sa zafarbia zmesou rovnakých objemov konjugátu anti-FITC a hovädzieho albumínu, značeného rodamínom a inkubujú sa 30 minút. pri 37 ° C. Po trojnásobnom premytí v FSB sa prípravky sušia na vzduchu. Aby sa eliminovala nešpecifická fluorescencia, antivírusové sérum sa pred použitím adsorbuje s homogenátom normálnej bunkovej kultúry a konjugát FITC sa spracuje s aktívnym uhlím podľa štandardných metód.

Ako povinné kontroly sa používajú nasledujúce kontroly: prípravky neinfikovaných kultúr ošetrené podobným spôsobom a prípravky infikovaných kultúr ošetrených v prvom štádiu normálneho a heterológneho antivírusového séra rovnakého druhu ako imunitné sérum proti rotavírusu.

V prípade pozitívnych výsledkov sa v cytoplazme buniek pozoruje zreteľne jasná zelená fluorescencia.

6.4. Elektroforotypová metóda rotavírusov

Metóda je založená na identifikácii rotavírusov pomocou polyakrylamidovej gélovej elektroforézy segmentov vírusovej genómovej RNA. Metóda umožňuje diferenciáciu kmeňov rotavírusu na základe rozdielov v elektroforetickej mobilite jednotlivých segmentov RNA rôznych izolátov, a preto sa široko používa v epidemiologických štúdiách. Metóda nevyžaduje predkultiváciu izolátov, má vysokú citlivosť a absolútnu špecificitu.

Táto metóda je obzvlášť zaujímavá pre epidemiológov pri skúmaní skupinových ochorení pri nákaze rotavírusovej infekcie.

Môže sa vykonávať na základe laboratórií vybavených elektroforetickým prístrojom.

Na analýzu postačuje 0,2 - 0,5 ml 10 - 20% fekálnej suspenzie. Suspenzie sa spracujú s freónom 113 a inkubujú s pronázou (0,2 mg / ml, 15 minút) v prítomnosti dodecylsulfátu sodného (1%) a etyléndiamíntetraacetátu sodného (0,001 M). Po pridaní octanu sodného (0,3 M) sa RNA deproteinizuje zmesou fenol: chloroform-izoamylalkohol a vyzráža sa 2,5 objemami etanolu (18 hodín pri -20 ° C alebo 2 hodiny pri -70 ° C). Zrazenina sa oddelí centrifugáciou, rozpustí sa vo vode a pridá sa disociačný tlmivý roztok. Elektroforéza sa uskutočňuje podľa metódy Laemmli v platniach s 10% gélom. Na farbenie RNA v géli sa zvyčajne používa dusičnan strieborný (0,011 M). Po postupe manifestácie v géli je viditeľných 11 pásov RNA, čo zodpovedá rotavírusovému genómovému segmentu.

6.5. Stanovenie imunoglobulínu triedy M v sére

pacienta s infekciou rotavírusom metódou na pevnej fáze

koaglutinačné reakcie (TRCA)

V tomto prípade sa v modifikácii používa princíp koaglutinačnej reakcie na pevnej fáze (pozri 4.3.4): na senzibilizáciu jamiek panelov sa použije 0,1 ml komerčného monošpecifického séra proti ľudskému IgM v riedení 1: 1000. Panely sa inkubujú 2 až 4 hodiny pri 37 ° C. Potom sa jamky premyjú FSBT, naplnia sa 3% roztokom želatíny a nechajú sa 30 minút pri 37 ° C. Jamky sa premyli FSBT a pripravili sa 0,05 ml študovaného, ​​ako aj zámerne pozitívneho a negatívneho séra, zriedeného 1: 100 FSBT (2 otvory pre každé sérum). Pri stanovení titra protilátok sa skúmajú dvojité riedenia testovaných vzoriek (1:10 - 1: 1280). Panely sa inkubujú 2 hodiny pri 37 ° C a po premytí sa do párovaných jamiek zavedie 0,05 ml diagnostického a kontrolného činidla. Reakcia sa berie do úvahy po 1 - 2 hodinách (pozri vyššie 4.3.4).

Rovnaký princíp, modifikovaný TRCA, sa používa na testovanie IgA a IgG protilátok na rotavírusovú infekciu, ako aj na analýzu mledziva a mlieka pre laktoglobulíny.

Metóda určovania imunoglobulínu triedy M v sére pacienta sa používa na včasnú diagnostiku manifestovaných foriem a ich diferenciálnu diagnostiku s asymptomatickými formami infekcie rotavírusom.

7. Protiepidemické opatrenia

Každý prípad akútnej črevnej infekcie spôsobenej rotavírusmi, najmä deťmi v prvom roku života, ako aj deťmi navštevujúcimi predškolské zariadenia, potrebuje starostlivú epidemiologickú analýzu na identifikáciu zdroja, hlavných spôsobov a faktorov prenosu na účely včasného vykonávania protiepidemických opatrení. v ohnisku.

Opatrenia zamerané na identifikáciu a neutralizáciu zdroja infekcie. Detekciu pacientov podozrivých z ochorenia vykonávajú lekári všetkých zdravotníckych zariadení: pri ambulantných návštevách, domácich návštevách, lekárskych prehliadkach detí v ústavoch, nemocniciach atď. Identifikovaní pacienti sú izolovaní od skupín detí. Lekárske pozorovanie a liečba pacientov sa môže vykonávať doma alebo v nemocnici. Deti, ktoré navštevujú detské ústavy prepustené z nemocnice alebo ktoré absolvovali domácu liečbu negatívnymi laboratórnymi testami, sú prijímané do detských skupín na základe certifikátu pediatra. Deti, ktoré mali WG a naďalej vylučujú rotavírusy (alebo rotavírusový antigén) výkalmi bez klinických prejavov infekcie, môžu byť prijaté do materských škôl a do skupín materských škôl - materských škôl, ktoré podliehajú organizácii priebežného lekárskeho pozorovania a opakovaným laboratórnym vyšetreniam 2 - 3 týždne od začiatku ochorenia alebo izolácie vírusu.

Epidemiologické vyšetrenie rodinných ložísk pacientov s FG sa vykonáva s ochorením detí mladších ako 2 roky a dospelých z počtu deklarovaných kontingentov. Epidemiológ ide do detskej inštitúcie s prieskumom, ak sa opakujú prípady nebakteriálnej gastroenteritídy.

Lekárske sledovanie detí, ktoré komunikujú s pacientmi, sa vykonáva do piatich dní odo dňa izolácie posledného chorého.

Laboratórne vyšetrenie rotavírusov (antigénov) detí a dospelých, ktorí komunikovali s pacientmi, a to v rodine aj v organizovaných skupinách, sa vykonáva na pokyn infektiológa a epidemiológa, ak existujú indikácie (výskyt v rodine alebo v detskom tíme opakovaných ochorení OKI s podobnou klinikou), hrubé porušenie hygienického a hygienického režimu, prítomnosť v ohnisku prepúšťania pracovníkov potravinárskych podnikov a osôb, ktoré im boli priradené, atď.). Povinné laboratórne vyšetrenie podlieha matke chorého dieťaťa v prvom roku života. Osoby, u ktorých sa rotavírusy (antigén) nachádzajú vo výkaloch, podliehajú dôkladnému klinickému vyšetreniu špecialistom na infekčné ochorenia. Pri absencii klinických prejavov choroby nie sú deti a zamestnanci tímu izolovaní.

Zamestnanci potravinárskych podnikov, vodohospodárske služby atď. v čase opätovného laboratórneho vyšetrenia a v rámci zariadenia sú zamestnaní lekári. Opakované laboratórne vyšetrenie osôb vylučujúcich rotavírusy (antigén) stolicou sa vykonáva podľa predpisu infektiológa a epidemiológa s intervalom 5-7 dní s použitím komplexného laboratórneho vyšetrenia.

Ak sa v detských inštitúciách vyskytnú skupinové ochorenia, karanténne opatrenia sa vykonajú do 5 dní od momentu izolácie posledného pacienta.

Inštitúcie pravidelne vykonávajú zdravotnú a výchovnú prácu zameranú na prevenciu infekcie rotavírusom.

Opatrenia zamerané na porušenie mechanizmu prenosu infekcie.

Štúdie preukázali škodlivý účinok na rotavírusy pri +70 ° C po 15 minútach; ak sú vystavené ultrafialovému žiareniu, rotavírusy sa tiež inaktivujú po 15 minútach.

Z hľadiska ich odolnosti voči pôsobeniu široko používaných dezinfekčných prostriedkov sú rotavírusy blízko enterovírusov a hepatitídy A. Preto sa v centrách infekcie rotavírusom av nemocniciach, kde sú pacienti, odporúča vykonať dezinfekčné opatrenia podľa režimov a pomocou prostriedkov odporúčaných pre vírusovú hepatitídu A a enterovírusové infekcie (Príloha č. 4 k vyhláške Ministerstva zdravotníctva ZSSR N 752 z 07/08/81 a vyhláška Ministerstva zdravotníctva ZSSR N 916 zo dňa 08/04/83). Mimoriadna pozornosť by sa mala venovať správnemu zaobchádzaniu s rukami osôb, ktoré slúžia deťom, ako aj bradavkám, hračkám, riadu a ostatným pomôckam na starostlivosť o pacienta.

Odporúča sa pravidelné ultrafialové žiarenie. Ultrafialové žiarenie sa zvyčajne vykonáva pomocou ožarovacích prístrojov - OBN-150 na 30 kubických metroch. m izby, OBP-300 60 cu. m izby a iné. Netienené prívody sú nastavené na 1 - 1,5 W na 1 m3. m miestnosti v neprítomnosti ľudí (aby sa zabránilo poškodeniu sliznice), tienené - vo výške 2 - 2,5 W na 1 cu. m, ožarovanie sa môže uskutočniť v prítomnosti ľudí. Čas dezinfekcie - 30 - 40 minút. Ožiarenie vzduchom by sa malo vykonávať po vyčistení miestnosti, výmene posteľnej bielizne a inej práce súvisiacej s tvorbou aerosólu prachu.

V špecializovaných oddeleniach nemocničného personálu by mali nosiť dýchacie masky.

Organizácia hygienických a hygienických opatrení zameraných na prevenciu infekcie rotavírusom sa vykonáva v súlade so súčasnými pokynmi a odporúčaniami pre iné infekcie s fekálno-mechanizmom šírenia patogénu.

Jedným z účinných opatrení na prevenciu infekcie rotavírusom u novorodencov je ich dojčenie.

Špecifická prevencia infekcie rotavírusom sa nevykonáva.